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微生物是發(fā)酵工業(yè)的靈魂,對(duì)微生物控制的發(fā)酵過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化,我們要了解發(fā)酵罐中微生物的生長(zhǎng)反應(yīng)特性。微生物細(xì)胞生長(zhǎng)是細(xì)胞個(gè)體內(nèi)許多化學(xué)反應(yīng)的綜合結(jié)果。這些反應(yīng)包括合成提供其它反應(yīng)需要的吉布斯自由能;利用底物合成結(jié)構(gòu)單元,再聚合成大分子物質(zhì),供合成細(xì)胞所需等。正常情況下,微生物細(xì)胞為了確保有序和高效生長(zhǎng),必須將這些反應(yīng)有機(jī)地結(jié)合在一起,經(jīng)濟(jì)地分配胞內(nèi)各代謝途徑的通量。大腸桿菌是發(fā)酵研究中用得最多的微生物。在大腸桿菌生長(zhǎng)過(guò)程中前人已觀察到下列現(xiàn)象∶(1)在大腸桿菌快速生長(zhǎng)期間,生物合...
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[實(shí)驗(yàn)原理]當(dāng)細(xì)胞置于非常高的電場(chǎng)中,細(xì)胞膜就變得具有通透性,能讓外界的分子擴(kuò)散進(jìn)細(xì)胞內(nèi),這一現(xiàn)象稱為電穿孔。運(yùn)用這一技術(shù),許多物質(zhì),包括DNA、RNA、蛋白質(zhì)、藥物、抗體和熒光探針都能載入細(xì)胞。作為一種基因轉(zhuǎn)導(dǎo)方法,電穿孔已被廣泛用于各種細(xì)胞類型,包括細(xì)菌、酵母、植物和動(dòng)物細(xì)胞;而且,它還能作為注射方法(稱為電注射),把各種外源物質(zhì)引入活細(xì)胞。與其他常用的導(dǎo)入外源物質(zhì)的方法相比,電穿孔具有很多優(yōu)點(diǎn)。一.不必象顯微鏡那樣使用玻璃針,不需要技術(shù)培訓(xùn)和昂貴的設(shè)備,可以一次對(duì)成百萬(wàn)...
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內(nèi)毒素去除方法概述內(nèi)毒素是存在于革蘭氏陰性細(xì)菌外膜中的致病因子,具有較好的耐熱性和穩(wěn)定性,對(duì)人體健康有著不可忽視的危害。本文將概述內(nèi)毒素的成分和特性,并討論了目前常見(jiàn)的內(nèi)毒素去除方法包括超濾去除法、活性炭法、表面活性劑萃取、強(qiáng)酸強(qiáng)堿、層析法等。同時(shí)還分析了各種方法的優(yōu)缺點(diǎn)以及在工業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用前景。一、超濾去除法和活性炭法內(nèi)毒素由多糖O抗原、核心多糖和類脂A等組成,作為細(xì)菌外膜的主要結(jié)構(gòu)成分,不易被化學(xué)藥品破壞。為了有效去除內(nèi)毒素,可以采用多種方法。超濾去除法通過(guò)使用孔徑適當(dāng)...
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【實(shí)驗(yàn)原理】磷酸鈣沉淀法是基于磷酸鈣-DNA復(fù)合物的一種將DNA導(dǎo)入真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染方法。磷酸鈣有利于促進(jìn)外源DNA與靶細(xì)胞表面的結(jié)合。磷酸鈣-DNA復(fù)合物粘附到細(xì)胞膜并通過(guò)胞飲作用進(jìn)入靶細(xì)胞,被轉(zhuǎn)染的DNA可以在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá),也可整合到靶細(xì)胞的染色體上從而產(chǎn)生不同基因型和表型的穩(wěn)定克隆。該方法可廣泛用于轉(zhuǎn)染許多不同類型的細(xì)胞。細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑【儀器、材料和試劑】(一)儀器、用具CO2培養(yǎng)箱[1]、10cm細(xì)胞培養(yǎng)平板、巴斯德吸管、微量移液器[2]、15ml錐形管、燒杯、量筒...
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CRISPR/Cas(ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats/CRISPR-associatedprotein)系統(tǒng)是當(dāng)前先進(jìn)的基因編輯技術(shù)之一。該技術(shù)因其高效、精確和相對(duì)容易操作的特點(diǎn),在生物醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)、生物技術(shù)等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用。CRISPR/Cas系統(tǒng)主要包含兩個(gè)部分:一個(gè)能夠識(shí)別目標(biāo)DNA序列的導(dǎo)向RNA(gRNA)和一個(gè)能夠切割DNA的Cas蛋白。通過(guò)設(shè)計(jì)特定的gRNA來(lái)引導(dǎo)Cas蛋白到特定的DN...
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