干細(xì)胞培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)的核心成分,其作用是為干細(xì)胞提供必要的營(yíng)養(yǎng)、生長(zhǎng)因子、pH緩沖和無(wú)菌環(huán)境,以維持細(xì)胞的存活、增殖和分化。
提供基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng):
氨基酸、糖類、維生素:為細(xì)胞代謝提供能量和原料。
無(wú)機(jī)鹽:維持滲透壓和離子平衡。
支持細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖:
血清(如FBS胎牛血清):提供生長(zhǎng)因子、激素、脂蛋白等,促進(jìn)細(xì)胞貼壁和增殖。
重組生長(zhǎng)因子:誘導(dǎo)干細(xì)胞自我更新,抑制分化。
維持pH穩(wěn)定:
通過(guò)緩沖系統(tǒng)中和代謝產(chǎn)生的酸性物質(zhì),保持培養(yǎng)基pH在7.2~7.4范圍內(nèi)。
防止污染:
添加抗生素預(yù)防細(xì)菌污染(注意:長(zhǎng)期使用可能影響細(xì)胞狀態(tài))。
培養(yǎng)基本身需無(wú)菌,通常經(jīng)過(guò)過(guò)濾除菌。
調(diào)節(jié)滲透壓:
通過(guò)電解質(zhì)濃度控制滲透壓,避免細(xì)胞因滲透壓失衡而破裂或皺縮。
支持特定細(xì)胞需求:
根據(jù)干細(xì)胞類型(如胚胎干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞)添加特異性成分。
二、干細(xì)胞培養(yǎng)基存放要求:
1. 未開封培養(yǎng)基的存放
低溫保存:
基礎(chǔ)培養(yǎng)基應(yīng)存放于4℃冰箱,避免反復(fù)凍融。
添加血清或生長(zhǎng)因子后的培養(yǎng)基需根據(jù)成分調(diào)整:
含血清的培養(yǎng)基:短期可存于4℃,長(zhǎng)期(>1周)需-20℃冷凍,使用前解凍。
無(wú)血清培養(yǎng)基:建議小量分裝,4℃保存(部分需-20℃)。
避光保存:
某些成分(如谷氨酰胺、生長(zhǎng)因子)對(duì)光照敏感,需用錫箔紙包裹或存放在深色容器中。
保質(zhì)期限制:
基礎(chǔ)培養(yǎng)基開封后建議1個(gè)月內(nèi)用完,含血清的培養(yǎng)基最好2周內(nèi)使用。
2. 配制后培養(yǎng)基的存放
無(wú)菌操作:
配制時(shí)在超凈臺(tái)內(nèi)完成,避免微生物污染。
分裝至無(wú)菌容器(如培養(yǎng)瓶、離心管),密封后標(biāo)記配制日期。
短期存放:
4℃保存,不超過(guò)1周(含血清培養(yǎng)基)。
無(wú)血清培養(yǎng)基可存于4℃或按說(shuō)明書要求冷凍。
長(zhǎng)期存放:
冷凍,使用前需緩慢解凍。
3. 特殊注意事項(xiàng)
避免反復(fù)凍融:
凍融會(huì)導(dǎo)致血清蛋白變性、生長(zhǎng)因子失活,建議分裝成單次用量后冷凍。
禁止陽(yáng)光直射:
存放位置遠(yuǎn)離窗戶或強(qiáng)光,防止光敏成分降解。
定期檢查:
觀察培養(yǎng)基是否渾濁、沉淀或變色,若出現(xiàn)異常則丟棄。
